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內毒素檢測知多少?(下篇)

來源:作者:人氣:-發表時間:2019-10-29 13:06:00【
內毒素檢測
內毒素知多少?
上一篇小編和大家一起探討了關于內毒素的部分問題:
  • 什么是內毒素?
  • 關于內毒素的檢測方法?
  • 內毒素檢測用具的要求?
關于內毒素的其他問題可隨時咨詢西寶生物科技(上海)股份有限公司科研團隊
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這篇文章請跟隨小編繼續探討關于內毒素的其他常見問題
【內毒素標準品】
根據檢測目的使用適當類型的內毒素標準品。
•需符合BET(美國藥典/ 歐洲藥典 / 日本藥典)的檢測,例如藥品和醫療器械的產品最終檢驗
→必須使用美國藥典,歐洲藥典或日本藥典標準的內毒素國家標準品。
•對材料,工藝流程和其他相關主題的檢測
→可以使用內毒素工作標準品(CSE)。
【樣本干擾】
有時候需要采取預防措施,以防止樣本對內毒素檢測有潛在影響(反應干擾)。這些干擾分為以下兩種類型:
(1)對LAL試劑的干擾
>•蛋白變性劑(例如酸,堿,尿素,表面活性劑,有機溶劑)
•蛋白酶和蛋白酶抑制劑
•螯合劑(會清除反應所需的鈣和鎂)
•對于比色法:著色物質(在約405 nm處具有相當大吸收的物質)
•對于比濁法:濁度
(2)對內毒素的干擾
•金屬離子(例如鐵,鋁,鎵和鉻離子。即使微摩爾級別的存在也會對測試產生影響)
•表面活性劑
樣本的干擾效果可以通過進行藥典中的干擾因子測試來衡量:即通過對加標了已知量的內毒素的樣本進行檢測,獲得加標內毒素的回收率。如果回收率在50%至200%范圍內,則可以確定該樣本不會造成影響,換句話說,檢測所得的內毒素濃度是正確的。如果發現樣本會造成影響,可以通過對樣本溶液進行稀釋,從而減少對測試的影響。然而,對樣本溶液的稀釋會提高了由原始溶液(預稀釋溶液)的濃度轉換而得的內毒素濃度值。合理的稀釋倍數(最大有效稀釋倍數),是根據待檢測的內毒素的所需濃度以及所用LAL試劑的檢測靈敏度來確定的。欲了解反應干擾因子和最大有效稀釋度的詳細信息,詳見藥典中的細菌內毒素檢測。
【Limulus ES的原理(內毒素特異性試劑)】
鱟試驗反應級聯
圖4. 鱟試驗反應級聯
LAL試劑和內毒素的級聯反應機制如圖4所示。如果反應體系中存在(1→3)-β-D-葡聚糖*,會激活G因子,引起伴有凝膠化的假陽性反應。在這種情況下,無論體系中是否存在內毒素,都會發生反應,意味著無法對內毒素進行特異性檢測。為此,我們研發出Wako's Limulus ES,該產品通過在反應體系中加入過量共存的(1→3)-β-D-葡聚糖(羧甲基化凝膠多糖),從而來抑制(1→3)-β-D-葡聚糖的干擾。因此,β-葡聚糖對LAL試劑的活化受到抑制,從而使內毒素特異性檢測能夠進行。過量的β-葡聚糖可以抑制其自身反應的原理如圖5所示:β-葡聚糖和LAL試劑之間反應的濃度范圍對于整個反應而言很窄。另一方面,內毒素和鱟試劑的反應在很寬的濃度范圍內都會發生,并且不受大量共存的β-葡聚糖的任何干擾。Wako的LimulusES就是根據這個原理而制作的(見圖6)。
*(1→3)-β-D-葡聚糖來源于霉菌(真菌)或經纖維素濾膜過濾所得。
羧甲基化凝膠多糖和LAL反應
圖5. 羧甲基化凝膠多糖和LAL反應
使用Toxinometer®(檢測時間設定為99 min)和Limulus HS進行檢測。
○:在99 min內檢測不到凝膠的生成
●:有凝膠的生成
羧甲基化凝膠多糖對使用Limulus HS和Limulus ES進行的內毒素檢測的影響
圖6. 羧甲基化凝膠多糖對使用Limulus HS和Limulus ES進行的內毒素檢測的影響
A:Limulus HS
B:Limulus ES
○:內毒素的系列稀釋
▲:含有1 μg/mL羧甲基化凝膠多糖的內毒素系列稀釋
【內毒素產品列表】
貨號
品名
規格
Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR (TM) ES-F SINGLE TEST SENSITIVITY 0.015 EU/mL (25 LAL Reagent vials + 1 CSE vial)
鱟阿米巴樣細胞裂解物PYROSTAR™ES-F單次測試 靈敏度0.015 EU/mL
25 tests
Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F MULTI TEST (without CSE)
鱟阿米巴樣細胞裂解物PYROSTAR™ES-F多次測試(不含CSE)
100 tests
Limulus ES-2 Single Test wako
鱟試劑ES-2 Single(適用于溶膠凝膠法和動態比濁法)
25 tests
Limulus ES-2 Test wako
鱟試劑ES-2 (適用于溶膠凝膠法和動態比濁法)
60 tests
Limulus Amebocyte Lysate ES-II, Lyophilized
鱟試劑LAL ES-II(適用于溶膠凝膠法和動態比濁法)
2 ml×5
Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F/Plate (with CSE)
鱟阿米巴樣細胞裂解物PYROSTAR™ES-F/板(含CSE)
160 tests
Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F/Plate (without CSE)
鱟阿米巴樣細胞裂解物PYROSTAR™ES-F/板(不含CSE)
200 tests
Limulus Color KY Single Test wako
鱟試劑比色法KY單次測試
25 tests
Limulus Color KY Test Wako
鱟試劑比色法KY多次型
60 tests
290-33771
Toxinometer ET-6000/J Standard Set
內毒素檢測儀ET-6000/J
1 set
291-35761
Toxinometer ET-7000/J Standard Set
內毒素檢測儀ET-7000/J(升級版)
1 set
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此文關鍵字:內毒素 內毒素檢測 鰲試劑
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